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SBJ-0334

碱性磷酸酶-PAS联合染色液

规格 酶类染色
  • 英文名:
  • Alkaline phosphatase -PAS combined staining solution
  • CAS号:
  • 分子式:
  • 品牌:
  • Sbjbio
  • MDL:
  • 储存条件:
  • 4℃,避光,6个月
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SBJ-0334-6×50mL ¥885.00元 准现货 EA 加入购物车

商品描述

文献引用

质检证书(COA)

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碱性磷酸酶-PAS联合染色液说明书

【产品组成】

碱性磷酸酶-PAS联合染色液由ALP孵育液、硝酸钴溶液、ALP硫化溶液、高碘酸溶液、Schiff试剂、亚硫酸溶液、ALP对照液组成。

【保存条件】

4℃,避光,3个月

【产品概述】

碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶,广泛分布于哺乳动物组织内,其活性所需最适pH9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜),如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮。此酶还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜及吞饮小泡。1946年McManus最先使用高碘酸-雪夫技术显示黏蛋白,该法常用来显示糖原和其他多糖。过碘酸(高碘酸)是一种强氧化剂,它能氧化糖类及有关物质中的1,2-乙二醇基使之变为二醛,醛与Schiff试剂能结合成一种品红化合物,产生紫红色。由于高碘酸还可氧化细胞内其他物质,使用时应注意选择好高碘酸浓度和氧化时间,使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于过氧化。

ALP-PAS联合染色液不仅能够显示碱性磷酸酶活性位点和糖原等物质,亦能区分二者。冰冻切片及石蜡切片均可。

【使用方法】

1、石蜡切片脱蜡至蒸馏水,冰冻切片直接入水。

2、冰冻切片在丙酮-氯仿等量混合液内,4℃固定2~5min。

3、切片入ALP孵育液(阴性对照切片入ALP对照液),置于37℃温箱。冰冻切片孵育5~15min,石蜡切片孵育2~12h。流水洗2min后入蒸馏水。

4、入硝酸钴溶液,置于37℃温箱染色5min。流水洗5min后入蒸馏水。

5、上述过程中配制ALP硫化工作液,即取试剂(C)用蒸馏水稀释50倍,即为ALP硫化工作

液,即配即用。切片入硫化工作液,孵育2min。

6、流水洗10min后入蒸馏水。

7、入高碘酸溶液,室温氧化2~5min。蒸馏水换洗3次。

8、入Schiff试剂,置于37℃温箱染色10~30min。

9、按亚硫酸溶液:蒸馏水=3:1的比例配制亚硫酸工作液,清洗3次,每次2min,入蒸馏水。

10、冰冻切片直接用甘油明胶封片,石蜡切片脱水。常规透明,中性树胶封片。

【染色结果】

碱性磷酸酶活性部位

黑色

PAS阳性物质

紫红色

【阴性对照】

1、ALP对照液为不含底物的孵育液。取相同的切片入ALP对照液,其余同上。结果为阴性。

2、(备选方案)切片进入ALP孵育液前,可先经碘液和5%硫代硫酸钠溶液各3min,充分水洗后再进行孵育等步骤,可用此法作阴性对照。

【注意事项】

1、本染色液适用于冰冻切片、石蜡切片。染色过程中注意控制高碘酸处理的时间,否则容

易褪色。

2、碱性磷酸酶显色后,经高碘酸应特别小心,严格控制时间,否则褪色。

3、ALP孵育液、ALP硫化液易失效,最好分成小分储存,一经开启立即使用。

4、ALP硫化液具有腐蚀性和刺激性气味,应小心操作。

5、对冰冻切片染色时,应减少切片在室温暴露的时间