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森贝伽生物：鸡红细胞制备与常见问题Q&A


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鸡的采血

01、心脏采血  

鸡右侧卧自然保定，从膝关节稍前下方处垂直地面进针采血。

要点：

（1）采血前鸡尽可能处于自然状态。

（2）垂直地面进针：刺入正确时，松开注射器，会看到注射器随心脏的自然跳动。

（3）先把针全部刺入，如采不出，可以一边向上提注射器，一边采血，注意向上提注射器时速度要慢。


02、翅静脉采血   

（1）捏住近心端，让翅静脉臌起。

（2）针头斜面向上，小角度刺入翅静脉中，待出现回血时，松开近心端，固定好针头进行采血即可。



鸡红细胞如何制备？


以1%鸡红细胞为例

把采集过动物血液的采血管依次放入卡套内，并将放置于离心机对角线的两个卡套配平，使其重量相同(相差不超过0.2g)，低温离心机4000r/min，离心10分钟。离心机的使用参照离心机的操作规程。


1、清洗红细胞

1.1   于超净台内采集上清液置于无菌血清瓶中即为血浆（不同的抗凝剂需做好标记），-20℃冷冻保存于固定区域


1.2   小心吸取红细胞上方的白细胞层，并弃去。


1.3   在每根吸除过白细胞的采血管中，加入和压积红细胞等体积的无菌1×PBS，并轻轻吹打混匀。


1.4   将混匀好的红细胞悬液转至15ml无菌离心管中，低温离心机2000r/min离心10分钟。


1.5   吸取上清液并弃去。


1.6   加入和压积红细胞等体积的无菌1×PBS，并轻轻吹打混匀。低温离心机2000r/min离心10分钟。重复1.5-1.6步骤一次，吸取上清液并弃去即为红细胞原液。


2、制作红细胞悬液
根据所需的红细胞百分比浓度，在血清瓶中加适量2-8℃保存的阿氏液和红细胞原液，制成1%的鸡红细胞悬液。

保存方法


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   （1%鸡红细胞保存条件：2-8℃，30天）



  注意事项：

  • 注意不要冻融

  • 每天需上下轻轻颠倒混匀

  • 注意无菌操作

  • 2-8℃保存，尽快使用

  • 尽量避免剧烈震荡


常见问题


1、 什么是溶血？
溶血，即血液中红细胞因为内外界各种原因破裂，血红蛋白溢出，导致血清、血浆由淡黄色变为血红色。实验过程中如果发生溶血现象，尽可能重新采血，因为溶血样本可能会对血液中的一些生化指标和激素含量产生影响。但若无法重新采血，只能根据自身需要测量的指标，将溶血与非溶血样本进行对照试验，判断是否有影响，如果无影响，即可使用溶血样本进行试验。


2、 如何判定溶血？
一般采用观察静置或离心后的标本来判断是否溶血。

【全溶血】溶液澄明，红色，管底无红细胞残留

【部分溶血】溶液澄明,红色或棕色，底部有少量红细胞残留;镜检红细胞稀少或变形 

【不溶血】红细胞全部下沉，上清液体无色澄明;镜检红细胞不凝聚

【红细胞凝聚】溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，振摇后不分散


3、哪些问题会导致溶血？

1、由于抽血困难，采血时定位进针不准、针尖在血管中探来探去造成血肿等而发生溶血。

2、注射器和针头连接不紧，采血时空气进入，或动物紧张导致血流不畅，抽血时间过长，都会导致血标本中混有泡沫，这种混有泡沫的血标本，放置一定时间后泡沫破裂或迅速干燥，造成血细胞破坏而发生溶血。

3、血标本在运输过程中（或离心前）过度振荡或储存不当。

4、不合格的塑料制品会因聚合不完全而具有毒性，这种毒性可造成溶血。

5、试管质量粗糙。

6、抽血消毒时，酒精未干就进行抽血。

7、操作过程中，可能引入的动物的毛发，而导致溶血。

8、尽量不要收集注射器推到最后的血，也不要使劲挤压注射器。



4、鸡红细胞有核吗？
 有细胞核。人和哺乳类的红细胞是无核的，而鸟类、两栖类、鱼类的红细胞是有核的。人的红细胞本来也有核的，是在后来发育过程中才失去核的。


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（鸡红细胞镜下图）