一、细胞概述

    RAW264.7中文全名为小鼠单核巨噬细胞白血病细胞，来源于雄性Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤，是常用的炎症细胞模型之一，常见于研究细胞吞噬、细胞免疫、分子免疫学。

RAW 264.7 是一种单核细胞/巨噬细胞系，具有松散贴壁的立方形或纺锤形细胞和圆形活细胞。细胞松散附着、堆积并变圆是正常的，尤其是在培养密集时。活细胞可以分离和漂浮，特别是当培养物变得更加融合时。这些未附着的细胞仍然有活力，应通过温和离心保留下来，然后重新加入烧瓶中。不同批次血清的细微差异会导致 RAW 264.7 细胞或多或少的附着。我们使用未经热灭活的优质血清，因为热灭活可以减少附着因子和生长因子。

二、细胞培养条件

三、细胞培养建议

1、细胞复苏：将含有1m细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5ml培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心3min，弃去上清液，补加4-6ml完全培养基吹匀。然后将细胞悬液加入培养瓶中过夜，第二天检查细胞密度并换液。

2、细胞传代：当细胞密度达到80%-90%，即可进行传代培养。

2.1弃去培养液上清，用不含钙、镁离子的PBS(BC-BPBS-01) 润洗细胞2次。

2.2加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-EDTA）BC-CE-005 于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，镜下观察细胞大部分圆缩并脱落，肉眼观察细胞培养瓶上部细胞呈挂线状滑落，迅速拿回操作台，于手心轻敲几下培养瓶，可见细胞呈沙粒状滑落，加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

2.3轻轻吹打细胞，完全脱落分散后吸出，在1000RPM条件下离心3min，弃去上清液，补加1-2ml吹匀。

2.4按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞重悬按1：2到1：4的比例分到新的培养瓶中。

3、细胞冻存

  冻存条件：20%FBS的培养基+10%DMSO（或使用细胞冻存液BC-CFM-01），2-8℃放置2小时，再将冻存管置于梯度降温冻存盒并放于-80度过夜，第二天转入液氮罐；