英文名称：RAW 264.7

中文名称：小鼠单核巨噬细胞白血病细胞

种 属：鼠源

组织来源：Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤；单核细胞；巨噬细胞。

生长特性：贴壁生长（胰酶会刺激分化）

细胞形态：不规则形

传代比例：1:2 ~ 1:3

换液频率：2~3次/周

倍增时间：12~30h

培养体系：DMEM(高糖）+10% Biochannel特级胎牛血清+1% P/S

培养条件：5%CO2 ；37℃

冻存条件：Biochannel 细胞冻存液，程序降温，液氮长期保存。

培养建议：

（a）在细胞生长的初始阶段，细胞以贴壁的形式生长并呈现出长方体的形态和有“伪足”延伸。随着培养时间的增加，细胞呈现圆形并以叠加的形式生长。细胞密度达到一定的程度，会有细胞以悬浮的方式散落到到培养基中，镜下观察会发现悬浮和贴壁的细胞会同时出现。

（b）该细胞传代时不需要用胰酶消化。传代时，用无菌细胞刮刮拭培养表面将细胞刮落，收集离心后重悬接种到新的培养瓶中。

（c）该细胞形态上包含松散贴壁的纺锤形和圆形或者立方形。当细胞密度较大时，细胞会轻微脱落变圆或者许多细胞堆积在一起，有些细胞甚至脱落漂浮。这些漂浮的细胞是存活的，在传代时应收集起来，离心后细胞沉淀可以继续培养。

（d）血清质量差异可能引起细胞贴壁能力变化，应选用高质量的胎牛血清。

（e）该细胞不建议使用胰酶消化，胰酶会刺激分化； 超过3天不传代细胞容易分化；培养时，存在少量分化细胞，属于正常现象。

（f）若需控制细胞的分化，RAW264.7使用吹打传代，能更好地控制细胞分化率。

收货事项：

（a）RAW 264.7 细胞贴壁较松，在包装过程中切勿有剧烈的晃动。

（b）快递运输路上受到颠簸，也可能会脱落。

（c）脱落的细胞悬浮在培养基中不容易聚焦 。

收到货后把细胞放进培养箱静置两个小时后观察细胞，就可以看到了。如果静置后看到的细胞仍偏少，请将瓶子里的培养基都转移到离心管里，1200 rpm（约250g）离心3分钟，即可看到沉淀的细胞。细胞全部脱落，慌乱之下可能会一个细胞都找不着。这个时候离心验证是最好的方法，RAW 264.7脱落后倾向于抱团，抱团时细胞是活着的，但很难贴壁。记得一定要把聚成团的细胞吹散成单细胞，不然细胞很难重新贴壁。

常见问题：

Q: 收货时细胞出现伪足，或是碎片较多怎么办？

A：受到运输影响，悬浮细胞会短暂性出现形态改变的现象，如伪足等。通过传代培养，1周左右可以恢复正常。一些细胞在运输途中死亡而产生碎片，通过传代离心可以去除。

Q：培养过程中细胞发生贴壁怎么办？

A: 少量细胞贴壁属于正常情况，将细胞悬液转移至新瓶中即可。当贴壁细胞的比例高于20%，说明细胞生长环境有异常，需排查培养箱设置、培养基成分，以及培养器皿是否异常。

Q：培养过程中细胞发生聚团怎么办？

A：少量细胞聚团，呈葡萄串状，属于正常现象，特别是细胞密度较低时，易出现这种情况。更换血清品牌或增大血清比例（不超过20%）有助于解决聚团问题。不建议将聚团的细胞吹散，等待密度高时，会自己分散开。

Q：培养基里一定要加β-巯基乙醇吗？

A：β-巯基乙醇是一种常用的培养补充剂，有抗氧化的作用，可减少氧化应激对THP-1细胞的影响。当细胞密度过大但需要维持时，可适当增加巯基乙醇的比例（不超过标准量的1.5倍）。

Q：镜下观察时，难以聚焦或估算密度怎么办？

A：悬浮细胞会随着液体流动，不容易聚焦，静置5-10min使细胞沉底，之后在轻轻放上显微镜观察，将有助于聚焦和估算细胞密度