① 消化过度：

在消化过程中缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度，镜下观察细胞剥离的状态，及时终止消化。

② 支原体污染：  

取培养24小时的培养基，检测支原体。清洁培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。

③ 培养基pH值过碱（NaHCO₃分解）：

可以使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO₂来调整培养液的PH值。

④ 细胞老化：

建议复苏新的保种细胞，一般细胞老化的细胞会持续出现较严重的形态变化或者凋亡的情况。

⑥ 接种细胞起始浓度太低或太高 。

建议调节最佳接种细胞浓度。当细胞浓度太高则贴壁位置不够，细胞浓度太低则势单力薄，培养基的轻微晃动就可能使其脱落。

① 为什么培养基颜色会有不同深浅：

不同品类的培养基中的酚红指示剂添加含量也是不相同的，所以客户会看到不同种类的培养基会有不同颜色；一般颜色的深浅为DMEM＞MEM＞DMEM/F12＞RPMI1640＞F12。

② 培养基在冰箱中为什么颜色会变深：

因为在空气中CO2浓度低，而培养基内CO2则会逐渐溢出，HCO3-减少，就会造成培养基偏碱，液体颜色变深。

③ 培养基中含有谷氨酰胺的保存条件：

谷氨酰胺对温度比较敏感，温度越高的话降解速度越快。并且谷氨酰胺在溶液中不稳定，一般应置于-20℃冰箱中保存。加有谷氨酰胺的液体培养基应存放在2℃–8℃温度中保存。

④ DPBS和PBS有什么区别：

这两者都属于磷酸盐缓冲液，成分上只有一点点磷酸盐的含量差异，均有等渗和调节pH的功能，大多数对于细胞的使用上可以通用。

⑤ HBSS和PBS/DPBS有什么区别：

HBSS缓冲液中盐成分较PBS和DPBS更复杂，且含有葡萄糖，可为细胞提供简单的营养，而PBS/DPBS不能提供营养。