杂交瘤技术是一种用于生产单克隆抗体的生物技术，由Georges Kohler和César Milstein于1975年发明，并因此获得了1984年的诺贝尔奖。该技术的基本原理是通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征：一种是经抗原免疫的小鼠脾细胞（B淋巴细胞），另一种是具有无限分裂能力的小鼠骨髓瘤细胞。

具体来说，B淋巴细胞在受到特定抗原刺激后，可以大量增殖并分泌针对该抗原的特异性抗体，但这些细胞在体外环境下存活时间较短；而骨髓瘤细胞则可以在培养条件下无限分裂和增殖，即具有所谓的永生性。通过将这两种细胞进行融合，可以形成一种新的细胞——杂交瘤细胞。这种细胞既保留了B细胞的抗体分泌功能，又具备了骨髓瘤细胞的永生性，能够在选择性培养基中持续生长和繁殖。

杂交瘤技术的操作流程通常包括以下几个步骤：

▪ 免疫小鼠：首先对小鼠进行免疫接种，使其产生针对特定抗原的抗体。

▪ 分离脾细胞：从免疫后的小鼠体内提取脾脏，并从中分离出B淋巴细胞。

▪ 融合细胞：将这些B细胞与骨髓瘤细胞进行融合，通过使用聚乙二醇（PEG）作为融合剂，使两者结合形成杂交瘤细胞。

▪ 筛选杂交瘤细胞：将融合后的细胞在含有次黄嘌呤、氨甲蝶呤和胸腺嘧啶（HAT）的选择性培养基中进行筛选，以淘汰未融合或非目标细胞，保留能够生长且能产生抗体的杂交瘤细胞。

▪ 二次筛选：进一步通过有限稀释法将杂交瘤细胞接种在多孔板上，每孔不超过一个细胞，通过培养让其增值，然后检测各孔上清液中抗体的特异性，最终确定阳性克隆。

系统的腹水法已逐渐被体外大规模培养所取代，这包括悬浮培养、微载体悬浮培养、微囊培养以及中空纤维培养等方法。这些方法不仅提高了单克隆抗体的产量，还便于质量控制和标准化生产。

杂交瘤细胞体外培养的工艺流程一般分为以下几个阶段：

▪ 细胞选择与融合：首先从免疫动物中获取B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，通过PEG诱导剂进行细胞融合，形成杂交瘤细胞。

▪ 筛选与克隆化：将融合后的细胞接种到含有HAT培养基的96孔板中进行筛选，只有成功融合的杂交瘤细胞才能在该培养基中生长。

▪ 工艺优化：根据具体需求，对培养条件进行优化，如调整培养基成分、改变搅拌速度等，以提高杂交瘤细胞的生长密度和抗体产量。

▪ 纯化与收获：最后通过收集培养上清液并离心去除细胞碎片，得到所需的单克隆抗体

1. 能够生产大量均一的单克隆抗体，结构稳定且亲和力较好。

2. 可以永久传代和大规模生产抗体。然而，该技术也存在一些局限性：周期较长，需要经过两次筛选过程。

3. 存在遗传异质性问题，可能影响抗体的一致性和效能。

4. 需要合适的培养基和设备维护。

总之，杂交瘤技术不仅为单克隆抗体的生产提供了稳定可靠的平台，也为免疫学和生物医学领域的发展做出了重要贡献。