BC-C-MO-004-1×10⁶ |
非洲绿猴SV40转化的肾细胞(COS7) |
| 规格 | 1×10⁶ |
| 产品编号 | 销售价 | 促销价 | 库存 | 数量 | 单位 | 加入购物车 |
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【货号】 BC-C-MO-004
【规格】 1*106 个/T25 培养瓶（或冻存管）
【保存】 液氮保存，长期
【产品介绍】
【操作步骤】 【细胞复苏】
1 、取出 1mL冻存管后，迅速放入 37℃水浴锅中不断摇晃使其解冻，直至冻存管中无结 晶（此过程尽量在 2min内完成）；
2 、准备 15mL离心管，加入 2-6mL完培，将冻存管中的细胞悬液移至离心管，1000 rpm 离心 3~5min；（比较难养的细胞可适量增加离心管中的完培）
3 、吸弃上清，用新鲜培养基重悬细胞，接种至无菌的培养器皿中，轻晃动混匀后放入 37℃ 、5%CO2 细胞培养箱中培养。
注：复苏第二天若细胞状态较好，但漂浮碎片较多可做换液处理；
复苏的细胞需要时间恢复状态，当复苏好后密度低于 80%时，2 天内暂时不要换液，细 胞生长状态恢复后再进行后续传代等操作；
【细胞传代】
当细胞汇合度达到 80%-90% ，即可传代培养。
收集细胞：贴壁细胞可以参考以下方法 1 、吸去培养液，加入不含钙镁的PBS ，轻轻润 洗瓶底 1-2 次，吸弃PBS；2、加入 0.25%胰酶-EDTA消化液（T25 瓶 1-2mL，T75 瓶 2-3mL）， 铺匀瓶底放入培养箱中消化 1-2min；（部分细胞贴壁较牢，可采用分步消化：将消化下来 的细胞转移至离心管终止，在培养瓶中加入胰酶继续消化，直至大部分细胞脱落）3 、倒置 显微镜下观察大部分细胞变圆脱落，迅速加入完全培养基终止消化，完培与胰酶比例为 2:1； 4 、轻轻吹打细胞后吸出转移至离心管中。半贴壁半悬浮细胞需先收集悬液至离心管再参考 贴壁细胞操作。
离心：收集好的细胞在 1000rpm条件下离心 3~5min ，离心好后弃除上清液。
接种：准备好新的培养瓶并添加适量完全培养基，在离心管加入 1-2mL完全培养基重悬 吹打均匀，初次传代将细胞悬液按 1:2 比例接种到新的培养瓶中，后续可根据细胞实际情况 按 1:2-1:4 的比例传代；接种完成后放入 37℃、5%CO2 细胞培养箱中培养。
悬浮细胞建议采用半换液传代：将培养瓶站立静置 5-10min ，肉眼可见细胞沉底，吸取 1/2~2/3 上清至离心管离心，将瓶内剩余悬液按 1:2 或 1:3 的比例转移至新的培养瓶，将离心 管中的细胞重悬后放入培养瓶添加新鲜完全培养基即可。
【细胞冻存】
收集细胞参考细胞传代步骤。
冻存液重悬：细胞按照传代步骤收集细胞至离心管并计数，根据计数的密度决定细胞冻 存数量，一般推荐细胞冻存密度为 1×106-1×107 个活细胞/管。离心后弃上清，加入配制好 的冻存液重悬，分配到冻存管中，每管 1mL。
冻存：将冻存管放入程序降温盒中进行梯度降温，然后放入-80℃冰箱降温，24h后将冻 存管转入液氮罐中。若没有冻存盒，可于冰箱 4℃放置 30min ，随后转移至-20℃冷冻 2h ， 接下来将其放于-80℃超低温冰箱中过夜，最终放置于液氮中以长期保存。
【注意事项】
（1）所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全柜内操作，并注 意防护。所有废液及接触过此细胞的器皿需灭菌后方能丢弃。
（2）若细胞在操作过程中发生污染，需对污染的细胞进行灭活方可丢弃。
（3）本库的细胞系（株）仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得 将本库细胞系（株）转让给第三者。
（4）细胞到货后建议在前 3 代时冻存一批细胞种子以备后续用。
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